Dag 3

I denna dag utförde vi andra metoder för att detektera LL37 genen som elektrofores, Southern Blott DNA fixering till membranet med UV bestrålning, inmärkning av LL37 gen med DIG-dUTP (Random priming),,prehybridisering samt hybridisering.

Elektrofores utfördes för separationen av insert från vektorn och detta görs på liknande sätt som tidigare och resultatet dokumenterades genom att gelen belystes med UV-ljus och fotograferades.   Blotting används för överföring av DNA från gelen  till nylon membran. Överföringen sker i en hög bestående av flera lager av olika komponenter ( pappershandduk, Watmans papper, gelen, membranet och plastfolie). Efter blotting fixerades DNA på membranet genom att det belyses med UV-ljus, detta görs för att DNA ska sitta fast på membranet. För att kunna detektera LL37 genen  kräver en probe  inmärkning (märkt med DIG-dUTP) som tillverkades genom random priming. 
Därefter gjorde vi en prehybridisering vilket innebär att man tillsätter en blockeringsreagens som blockerar de positiva laddningarna på membran för att märkt proben binder specifikt till LL37 gen, annars binder de ospecifikt till membran. Sedan gjorde vi hybridisering för att proben kunna binda specifikt till målsekvens och låt den övernatt.